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Name    
  Gerlinde WIESENBERGER
   
Projekt-Nummer  
  T 105
Projekt-Titel  
  Prozessierung und Stabilität mitochondrialer RNAs
   
FWF-Projektdatenbank  
  http://www.fwf.ac.at/de/projects/projekt_datenbank.asp
   
Zum Projekt
  Organellen besitzen ihr eigenes Genom, dessen Expression vor allem durch kernkodierte Gene kontrolliert wird. Die Regulation der mitochondrialen Genexpression spielt sich vor allem auf der post-transkriptionellen Ebene ab. Zur Zeit gibt es noch wenige und sehr punktuelle Informationen über Gene, die für die Prozessierung und den Abbau mitochondrialer Transkripte benötigt werden. Im vorliegenden Projekt soll die Bäckerhefe Saccharomyces cerevisiae als Modellorganismus verwendet werden, um die molekularen Mechanismen des RNA Metabolismus in Mitochondrian zu studieren.

Eines der Kerngene aus Saccharomyces cereviside, die Einfluss auf die 5-Prozessierung und Abbau mitochondrialer RNAs haben, ist PET 127, welches im Rahmen einer früheren Arbeit isoliert und charakterisiert wurde. PET127 kodiert für ein mitochondriales Membranprotein, das vermutlich für die 5-Prozessierung mehrerer mitochondrialer Transkripte benötigt wird und/oder eine wichtige Kontrollfunktion im Abbau mitochondrialer RNAs haben könnte.

Im Rahmen des Projektes sollen Suppressoren einer pet127 Deletion untersucht werden und ausserdem Mutationen in anderen Kerngenen identifiziert werden, die zu einem synthetischen Defekt zusammen mit einer Deletion von PET127 führen. Die Überexpression von PET127 in Wildtypstämmen führt zum rapiden und irreversiblen Verlust der mitochondrialen DNA. Es ist geplant, Gene zu suchen, die imstande sind -durch Überexpression-oder Mutation diesen Effekt der PET127 Überexpression zu unterdrücken. Die Gene, die in den oben genannten genetischen-Ansätzen gefunden werden, sollen untersucht werden. Ihre Funktionen in der Hefe werden durch Gendisruption und Überexpression studiert werden und ihr Zusammenspiel wird auch biochemisch untersucht werden.

Eine am 3'-Ende aller mitochondrialen mRNAs vorhandene konservierte Sequenz, (Dodekamerequenz) ist wahrscheinlich für die Prozessierung mitochondrialer mRNAs verantwortlich. Weiters wird vermutetet, dass Proteine, die an diese Dodekamersequenz binden, mitochondriale mRNAs vor dem Abbau durch eine 3'-5' Exonuklease beschützen. Um die Funktion dieser konservierten Sequenz zu untersuchen, soll diese Dodekamersequenz in einem Reportergen mutiert werden. Die Konsequenzen der Mutationen sollen untersucht werden. Weiters ist geplant, durch eine Kombination von genetischen und biochemischen Methoden Gene zu suchen, die für Proteine kodieren, welche an these Dodekamersequenz binden. Mittels Gendisruption sollen die Funktionen dieser Gene untersucht werden.

Durch these Untersuchungen soil nicht nur das Verstandnis über den RNA Metabolismus in Mitochondrien der Bäckerhefe vertieft werden, sie sollen auch dazu beitragen, Rückschlüsse auf ähnliche Funktionen in Organellen höherer Eukaryonten machen zu können.

   
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